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【產(chǎn)品推介】LAG-3靶點(diǎn)細(xì)胞篩選模型

原載自:www.bchzp.com[技術(shù)資料頻道]  2021-07-09  瀏覽次數(shù):1867

淋巴細(xì)胞活化基因3(Lymphocyte-activation gene 3,LAG-3),又稱為CD233,由Triebel等人于1990年發(fā)現(xiàn)。LAG-3是一個(gè)Ⅰ型跨膜蛋白,屬于免疫球蛋白(Ig)超家族,主要表達(dá)在T細(xì)胞和NK細(xì)胞表面。LAG-3基因位于第12號(hào)染色體,LAG-3蛋白由胞外區(qū)、跨膜區(qū)和胞質(zhì)區(qū)3個(gè)部分組成,LAG-3的胞外區(qū)有4個(gè)免疫球蛋白超家族類似(IgSF-like)結(jié)構(gòu)域(D1-D4),D1結(jié)構(gòu)域中有一個(gè)環(huán)狀結(jié)構(gòu),使LAG-3可以與MHC II(major histocompatibility complex II,MHC II)類分子結(jié)合,LAG-3的胞質(zhì)區(qū)由三個(gè)部分組成:絲氨酸磷酸化位點(diǎn)、KIEELE元件和谷氨酸脯-氨酸二肽重復(fù)序列(EP repeat),其中KIEELE元件參與了LAG-3下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),是LAG-3調(diào)節(jié)T細(xì)胞功能所必需的。LAG-3主要配體為組織相容性復(fù)合體II類分子(major histocompatibility complex II,MHC II),此外還可與半乳糖凝集素-3(Galectin-3)、肝竇內(nèi)皮細(xì)胞凝集素(LSECtin)、FGL1(fibrinogen-like protein1)等相互作用來調(diào)節(jié)T細(xì)胞應(yīng)答。

 

 

LAG-3是T細(xì)胞的一個(gè)抑制性免疫檢查點(diǎn),與PD-1和CTLA-4類似,當(dāng)LAG-3與配體結(jié)合時(shí)能負(fù)向TCR的活性,調(diào)控T細(xì)胞的增殖、激活、功能和穩(wěn)態(tài),包括負(fù)向調(diào)節(jié)CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞的增殖和功能,參與調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)抑制性作用。當(dāng)處于腫瘤環(huán)境或慢性感染時(shí),長(zhǎng)期的抗原刺激會(huì)導(dǎo)致T細(xì)胞LAG-3持續(xù)高表達(dá),引起T細(xì)胞耗竭(exhaustion)。阻斷LAG-3信號(hào)通路能促進(jìn)耗竭T細(xì)胞恢復(fù)功能,調(diào)控T淋巴細(xì)胞和抗原呈遞細(xì)胞(APCs)的信號(hào)通路,在適應(yīng)性免疫反應(yīng)中起到重要作用,讓T細(xì)胞重新獲得細(xì)胞毒性活性,降低調(diào)節(jié)T細(xì)胞抑制免疫反應(yīng)的功能,從而增強(qiáng)對(duì)腫瘤的殺傷效果。因此LAG-3已成為腫瘤免疫治療的一個(gè)非常具有潛力的靶點(diǎn)。

 




LAG3-3靶點(diǎn)藥物研發(fā)現(xiàn)狀


 

LAG-3的靶向藥物目前均處于臨床實(shí)驗(yàn)階段,尚無藥物上市,主要有兩類LAG-3調(diào)節(jié)劑用于治療癌癥和自身免疫性疾?。?/span>

 

(1) 可溶性LAG-3重組蛋白(如IMP321),已進(jìn)臨床階段,作為抗原提呈細(xì)胞激活劑增進(jìn)免疫反應(yīng),也可與化療藥物或免疫抑制劑藥物聯(lián)合使用以加強(qiáng)患者免疫應(yīng)答。

 

(2) LAG-3單抗藥物,目前全球有近30款進(jìn)入臨床試驗(yàn),但尚無藥物上市,其中進(jìn)展最快的是BMS的Relatlimab,已完成II/III期臨床研究試驗(yàn),達(dá)到了無進(jìn)展生存期(PFS)的主要研究終點(diǎn),該試驗(yàn)評(píng)估了Relatlimab與Opdivo(納武利尤單抗)聯(lián)合治療先前未經(jīng)治療的轉(zhuǎn)移性或不可切除的黑色素瘤患者的療效和安全性。LAG-3單抗目前主要與其它免疫檢查點(diǎn)抑制(如PD-1單抗)聯(lián)合使用,現(xiàn)有20項(xiàng)NIH在冊(cè)針對(duì)LAG-3的臨床試驗(yàn)中有13項(xiàng)與PD-1抑制劑聯(lián)用。
 




LAG-3靶點(diǎn)藥物細(xì)胞篩選模型

針對(duì)LAG-3靶點(diǎn)藥物開發(fā)和靶點(diǎn)研究的需求,我們開發(fā)了LAG-3系列藥篩細(xì)胞株。



 LAG3/HEK293 CBP74051


Figure 3. Recombinant HEK293 stably expressing human LAG3.


LAG3/CHO CBP74052


Figure 4. Recombinant CHO cells constitutively expressing human LAG3.


 
LAG3/NFAT-Luc/Jurkat CBP74060



Figure  5.  Detect Luciferase assay by Promega Bright-Glo Luciferase Assay System. Jurkat-NFAT-LAG3-Luciferase Reporter cells were stimulated by Jurkat cells,the EC50 was 0.17μg/ml.

 

LAG3/IL2-Luc/Jurkat CBP74079


8810511289207041943-14.jpg


Figure 6. Dose Response of Anti-LAG3 Neutralizing Antibody in LAG3/lL2 Promoter Reporter-Jurkat Cells, the EC50=2.99μg/ml.




 

 

 

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