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人結(jié)腸癌細(xì)胞株凍存的原則是要逐步緩慢降溫

原載自:www.bchzp.com[行情動態(tài)]  2018-12-12  瀏覽次數(shù):1565

  部分細(xì)胞在運(yùn)輸過程中,人結(jié)腸癌細(xì)胞株由于不斷震蕩及環(huán)境不適,可能導(dǎo)致細(xì)胞破碎死亡,從而使培養(yǎng)基中漂浮很多細(xì)胞碎片及顆粒狀物質(zhì)。這種情況下,平衡后,貼壁細(xì)胞用PBS洗兩遍再加新的培養(yǎng)基培養(yǎng)或者傳代至新瓶中培養(yǎng)即可;懸浮細(xì)胞可以離心(1000rpm,3min)收集細(xì)胞,并用PBS重懸后再離心一次,再用新的培養(yǎng)基重懸并接種細(xì)胞。
  人結(jié)腸癌細(xì)胞株凍存的原則是要逐步緩慢降溫,以避免細(xì)胞內(nèi)部形成冰晶對細(xì)胞造成傷害。
  1) 貼壁細(xì)胞經(jīng)消化、離心收集,懸浮細(xì)胞經(jīng)離心收集;
  2) 大約106個細(xì)胞加入1ml凍存液(細(xì)胞培養(yǎng)液和10%DMSO),用吸管吹打,使細(xì)胞分散成單細(xì)胞懸液;
  3) 加入到凍存管中。如用1.8ml的凍存管,每管不要加入超過1.5ml的細(xì)胞懸液;
  4) 在凍存管上標(biāo)明細(xì)胞名稱及凍存日期;
  5) 用厚布或衛(wèi)生紙包裹凍存管,置于4℃半小時,然后置于-20℃兩小時,再置于-40℃兩小時,然后置于液氮上方置夜;第二天將細(xì)胞置于液氮中;如果僅想提取細(xì)胞內(nèi)的東西可以直接放在-20度的冰箱中。
  6) 記下凍存管存放的位置,作好凍存記錄。
  人結(jié)腸癌細(xì)胞株注意事項:
  1、觀察細(xì)胞在低倍鏡(4或5X物鏡)下進(jìn)行,否則不能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度??醇?xì)胞的形態(tài)請在10X或20X物鏡下。
  2、瓶中運(yùn)輸培養(yǎng)基不能重復(fù)再用,請換用加雙抗的新培養(yǎng)基,細(xì)胞凍存后,培養(yǎng)基中可不加任何抗生素。
  3、有些細(xì)胞貼壁不牢,如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落,可離心吹打后接種到新瓶內(nèi)。
  4、收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請及時與我們。
  人結(jié)腸癌細(xì)胞株是一種成團(tuán)、貼壁生長的細(xì)胞,如果狀態(tài)好的情況下,生長非??欤?xì)胞形態(tài)是不太規(guī)則的三角形.在低濃度時,此細(xì)胞長梭型(不好描述),高濃度時長成一張地毯,后者才是狀態(tài)好的。

 

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