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ATCC細(xì)胞的分類(lèi)檢測(cè)是怎么完成的?

原載自:www.bchzp.com[行情動(dòng)態(tài)]  2021-09-10  瀏覽次數(shù):953

   ATCC細(xì)胞說(shuō)明書(shū)有關(guān)于細(xì)胞復(fù)蘇和傳代的詳細(xì)步驟,除說(shuō)明書(shū)外,還有另外一份重要文件-COA(Certificate of Analysis)。COA中包含具體批次信息,如每管細(xì)胞的數(shù)量,建議復(fù)蘇使用的培養(yǎng)基用量,已知細(xì)胞的傳代代次等重要信息。
  ATCC細(xì)胞的分類(lèi)檢測(cè)步驟如下:
  1.樣本儲(chǔ)存
  收集標(biāo)本前必須清楚要檢測(cè)的成份是否足夠穩(wěn)定。對(duì)收集后當(dāng)天進(jìn)行檢測(cè)的標(biāo)本,儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆?,如有特殊原因需要周期收集?biāo)本,將標(biāo)本及時(shí)分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。避免反復(fù)凍融。標(biāo)本2-8℃可保存48小時(shí),-20℃可保存1個(gè)月。-70℃可保存6個(gè)月。部分激素類(lèi)標(biāo)本需添加抑肽酶。
  2.試劑盒成分
  人、綿羊、小鼠、大鼠、豬、兔、山羊、牛、馬、豬;植物細(xì)胞因子、骨代謝、細(xì)胞凋亡、激素內(nèi)分泌、活性多肽、肝纖維化、自身抗體科研Elisa檢測(cè)試劑盒。主要用于科研方面,不用于臨床診斷??梢杂糜跈z測(cè)各種指標(biāo)。
  相關(guān)操作方法:
  1.取成年新西蘭大白兔,耳緣靜脈注射空氣處死后,取下兔子的雙腿,立即用75%乙醇浸泡。
  2.移入細(xì)胞房?jī)?nèi),去除雙腿表面的皮毛及肌肉,剪取關(guān)節(jié)段,移至超菌工作臺(tái)內(nèi)。
  3.PBS洗滌數(shù)次,用手術(shù)刀或彎剪將關(guān)節(jié)表面的軟骨組織取下。
  4.軟骨組織塊靜置5min,棄去上層液體及懸浮組織,將軟骨組織剪成1mm3的大小。移到離心管中加3倍體積的0.25%胰蛋白酶,置入37℃的恒溫?fù)u床中,振蕩消化15-20min。
  5.4℃靜置5min;棄上清,PBS洗滌,去上清。加入0.2%膠原酶II,置入37℃的恒溫?fù)u床中,振蕩消化2H。
  6.加入生長(zhǎng)培養(yǎng)基終止消化,反復(fù)吹打后依次通過(guò)200目濾網(wǎng)。收集濾液,1200rpm離心8min,棄上清,用DMEM*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞,放入37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
  7.細(xì)胞傳代后放入預(yù)置有薄骨片或蓋玻片的培養(yǎng)板中進(jìn)行培養(yǎng)。細(xì)胞*展開(kāi)后即可固定做原代鑒定。

 

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