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ATCC細胞計數(shù)方式

原載自:www.bchzp.com[行情動態(tài)]  2016-06-15  瀏覽次數(shù):2216

   ATCC細胞培養(yǎng)所使用的器皿必須干凈,所以在ATCC細胞培養(yǎng)工作中,器械的清洗是十分重要的,也是起關鍵性作用的工作,它直接影響到ATCC細胞培養(yǎng)的成敗。
 ?。?)新玻璃器皿的清洗步驟:先用自來水或肥皂水刷洗干凈,放入洗液中過夜或浸泡幾天,取出用自來水沖洗8至10次。然后,用蒸餾水洗3次,用去離子水(或三蒸餾水)洗2-3次,烤干、包裝、滅菌。
 ?。?)橡皮制品的清洗步驟:一般選用白皮橡皮塞,使用前先用自來水洗涮干凈,以后用2%NaOH煮20分鐘,用自來水沖洗5-6次,再用1.3%HCl煮30分鐘,用自來水沖洗5-6次,用蒸餾水洗3次,zui后用去離子水洗,干后包裝滅菌。
  ATCC細胞計數(shù)一般用血球計數(shù)板,按白血球計數(shù)法進行計數(shù)。
  操作方法如下:
  1.首先取待稀釋的ATCC細胞懸液1ml加4ml生理鹽水(或Hank液)作5倍稀釋。
  2.先將特制的蓋玻片放在血球計數(shù)板上,使兩側(cè)均現(xiàn)帶色牛頓環(huán)。用血色素吸管(或ATCC細胞管)取少量待測ATCC細胞懸液,沿蓋玻片邊緩緩滴入,讓其自由滲入,待整個蓋玻片下均充滿ATCC細胞懸液為宜。注意不要使液體流到旁邊的凹槽中。
  3.在顯微鏡下,用10′10的倍數(shù)進行計數(shù),所用計數(shù)板如圖2所示。
  4.計數(shù)的方法:計算計數(shù)板的四角大方格(每個大方格又分16個小方格)內(nèi)的ATCC細胞數(shù)。計數(shù)時,只計數(shù)完整的ATCC細胞,若聚成一團的ATCC細胞則按一個ATCC細胞進行計數(shù)。在一個方格中,如果有ATCC細胞位于線上,一般計上線ATCC細胞不計下線ATCC細胞,計左線ATCC細胞不計右線ATCC細胞,計數(shù)誤差不能超過±5%。
  5.計數(shù)的換算:計完數(shù)后,需換算出每毫升懸液中的ATCC細胞數(shù)。由于計數(shù)板中的每體積即為0.0001cm2。故可按下式計算
  原ATCC細胞懸液ATCC細胞數(shù)/ml=n/4′10000′5(稀釋倍數(shù))
  n=四大格內(nèi)的ATCC細胞總數(shù)
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