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離體培養(yǎng)ATCC細(xì)胞系

原載自:www.bchzp.com[行情動(dòng)態(tài)]  2016-06-27  瀏覽次數(shù):1935

   離體培養(yǎng)ATCC細(xì)胞系一般要參考該種動(dòng)物的體溫設(shè)計(jì)培養(yǎng)時(shí)所用溫度。通常哺乳動(dòng)物的體溫在37-38.5°C,禽類略高些,溫度在39°C-40°C。因此,離體哺乳動(dòng)物ATCC細(xì)胞系培養(yǎng)的溫度zui適為37-38.5°C。在較低溫度環(huán)境中,對(duì)ATCC細(xì)胞系影響不大,但細(xì)胞系對(duì)較高溫度卻比較敏感。
  ATCC細(xì)胞系生長(zhǎng)、繁殖的zui適條件是它們?cè)跈C(jī)體內(nèi)所處的條件,但如將組織、細(xì)胞系從機(jī)體內(nèi)取出,讓其在離體條件下生存,那就必須模擬機(jī)體的環(huán)境。然而機(jī)體畢竟是太復(fù)雜了,所以在體外只能保證ATCC細(xì)胞系生長(zhǎng),繁殖所需要的zui基本因素,現(xiàn)簡(jiǎn)單介紹這些因素的作用。
  1.培養(yǎng)基(液):ATCC細(xì)胞系培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基主要是人工合成的。通常其主要成分含有氨基酸、維生素、糖類、無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)因子和其他的輔助物質(zhì)。當(dāng)然不同的組織和ATCC細(xì)胞系對(duì)培養(yǎng)基成分的要求有所不同,因而進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)應(yīng)區(qū)別對(duì)待,為其選擇zui適條件的配方。配制時(shí)應(yīng)注意以下幾點(diǎn):
 ?。?)水是ATCC細(xì)胞系生命活動(dòng)的重要因素之一,細(xì)胞系培養(yǎng)用的各種液體都要用水配制。由于有毒物質(zhì)和元素等即使含量很低也能引起細(xì)胞系培養(yǎng)的失敗,所以ATCC細(xì)胞系中所用的水必須經(jīng)過(guò)高度的純化。通常使用的是三次蒸餾水或去離子水。
  水質(zhì)的好壞可用電導(dǎo)儀檢測(cè)其電阻值,即水中離子的導(dǎo)電狀況,越低的水含離子越少,電阻值也越高。一般以25°C時(shí)的歐姆(W)/cm表示。ATCC細(xì)胞系培養(yǎng)用水的電阻值一般選用100萬(wàn)歐以上的去離子水為宜。
 ?。?)無(wú)機(jī)離子既是維護(hù)ATCC細(xì)胞系生命所需要的成分,而且對(duì)維持一定的滲透壓、緩沖和調(diào)節(jié)溶液的酸堿度等方面都起著重要的作用。所以在配制ATCC細(xì)胞系培養(yǎng)液時(shí),必須根據(jù)這幾方面的需要,加入必需的一些無(wú)機(jī)鹽類。就多數(shù)動(dòng)物來(lái)說(shuō),所需的無(wú)機(jī)鹽類有Na+,K+,Ca2+,Mg2+,Cl-,碳酸鹽,磷酸鹽等。它們彼此之間常保持一定的比例。破壞了這種關(guān)系,就會(huì)使培養(yǎng)的ATCC細(xì)胞系受到損害。
 ?。?)血清是ATCC細(xì)胞系培養(yǎng)液中的重要成分之一。血清中含有豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),如蛋白質(zhì)和核酸等,血清不僅為細(xì)胞系的生長(zhǎng)提供所必需的營(yíng)養(yǎng),還具有促生長(zhǎng)能力。血清對(duì)ATCC細(xì)胞系附著和生長(zhǎng)均有明顯的促進(jìn)作用,并能中和有毒物質(zhì)的毒性,使細(xì)胞系不受到損傷。用于細(xì)胞系培養(yǎng)的血清來(lái)源是多種的,如人血清、馬血清、兔血清等。zui常用的是牛血清。一般講動(dòng)物愈年輕,其血清愈有利于細(xì)胞系生長(zhǎng),故成年牛血清不如犢牛的好。ATCC細(xì)胞系培養(yǎng)中所用血清的質(zhì)量會(huì)直接影響到細(xì)胞系生長(zhǎng)的狀況。
 ?。?) pH值對(duì)細(xì)胞系生長(zhǎng)有影響。來(lái)源不同的細(xì)胞系,由于它們處于有機(jī)體的不同部位或器官,其所處外環(huán)境的pH值也不相同,所以在培養(yǎng)ATCC細(xì)胞系時(shí),應(yīng)參考該ATCC細(xì)胞系在機(jī)體內(nèi)所處外環(huán)境的pH值配置適宜pH培養(yǎng)基(液)。一般以中性為好,剛開(kāi)始培養(yǎng)的哺乳動(dòng)物的細(xì)胞系,pH在7.0左右較好,貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞系在pH7.2-7.4生長(zhǎng),以不超過(guò)pH6.8-7.6為宜。高于或低于此限度時(shí),往往會(huì)引起細(xì)胞系死亡。在ATCC細(xì)胞系培養(yǎng)過(guò)程中,必須注意培養(yǎng)液pH值改變與細(xì)胞系生長(zhǎng)的關(guān)系,找出規(guī)律。在pH值變得不適于ATCC細(xì)胞系生長(zhǎng)時(shí),應(yīng)及時(shí)更換新的營(yíng)養(yǎng)液。

 

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